Trong các thí nghiệm ELISA, độ chính xác của tỷ lệ pha loãng ảnh hưởng trực tiếp đến độ tin cậy của kết quả, nhưng trong thực tế, lỗi thường do sơ suất chi tiết. Để tránh các vấn đề như vậy, sau đây bổ sung một số điều cần lưu ý quan trọng:

1. Xác minh thử nghiệm trước gradient

Đối với các mẫu được phát hiện hoặc các tác nhân hàng loạt mới, nên tiến hành tiền thí nghiệm pha loãng gradient trước (ví dụ: 1: 10, 1: 50, 1: 100, v.v.), quan sát mối quan hệ tuyến tính giữa các giá trị tín hiệu và độ pha loãng. Nếu mẫu nồng độ cao xuất hiện "hiệu ứng móc" (tín hiệu không tăng ngược lại giảm), cần tối ưu hóa tỷ lệ pha loãng hơn nữa để tránh âm tính giả do quá liều kháng nguyên.

2. Lựa chọn và tính nhất quán của dung dịch pha loãng

Các chất pha loãng khác nhau (ví dụ: PBS, bộ đệm ma trận mẫu) có thể ảnh hưởng đến hiệu quả gắn kháng nguyên. Nếu mẫu là huyết thanh, bạn nên sử dụng PBS có chứa 1% BSA để giảm hấp phụ không đặc hiệu. Tất cả các bước pha loãng yêu cầu sử dụng cùng một lô dung dịch pha loãng, tránh sự khác biệt về thành phần đưa vào các biến số.

3. Tiêu chuẩn hóa hoạt động pipet

- Với pipet được hiệu chỉnh, phương pháp hút ngược được khuyến nghị để tăng độ chính xác khi có khối lượng thấp như<10μL.

- Thực hiện theo thứ tự "từ cao xuống thấp" khi pha loãng: chuẩn bị nước mẹ nồng độ cao trước, sau đó pha loãng dần, tránh lỗi tích lũy khi vận hành khối lượng nhỏ liên tục nhiều bước.

4. Cơ chế ghi chép và kiểm tra lại

Trong ghi chép thí nghiệm cần đánh dấu rõ tỷ lệ pha loãng, thể tích và số lô thuốc thử sử dụng của mỗi bước. Quá trình tính toán nên được xem xét độc lập bởi một nhân viên thí nghiệm khác, đặc biệt là sơ đồ pha loãng nhiều giai đoạn phức tạp.

5. Kiểm soát các yếu tố môi trường

Biến động nhiệt độ có thể ảnh hưởng đến độ chính xác của thể tích chất lỏng, đặc biệt là khi pha loãng nhiều lần. Mẫu và thuốc thử được cân bằng ở nhiệt độ phòng (20-25 ° C) trước khi vận hành và pha loãng trong môi trường không có luồng không khí mạnh.

Bằng cách hệ thống hóa các liên kết trên, độ lệch dữ liệu do tỷ lệ pha loãng không đúng có thể được giảm đáng kể. Nếu kết quả vẫn bất thường, bạn nên kiểm tra lại các bước pha loãng đường cong tiêu chuẩn hoặc sử dụng các kỹ thuật khác như SPR và Western blot để xác minh chéo nồng độ phân tử mục tiêu. Ý thức kiểm soát sai sót của khoa học, mới là bảo đảm cốt lõi để đạt được số liệu có thể lặp lại.

‍

‍