Khi nuôi cấy các tế bào vi mạch của con người, việc lựa chọn môi trường và chi tiết hoạt động ảnh hưởng trực tiếp đến trạng thái tăng trưởng của tế bào và độ tin cậy của kết quả thí nghiệm. Dưới đây là một lưu ý bổ sung cho một số lưu ý chính:

1. Chất lượng huyết thanh và ổn định hàng loạt

Nếu bạn sử dụng môi trường huyết thanh (chẳng hạn như DMEM với 10% FBS), bạn cần đảm bảo nguồn huyết thanh đáng tin cậy và tránh nhiễm mycoplasma hoặc nội độc tố. Có thể có sự khác biệt về yếu tố tăng trưởng giữa các lô huyết thanh khác nhau, nên thử nghiệm hàng loạt trước hoặc chọn môi trường không có huyết thanh để giảm biến số.

2. Chiến lược bổ sung yếu tố tăng trưởng

Pericytes nhạy cảm với các yếu tố tăng trưởng như PDGF-BB, bFGF, nhưng nồng độ quá cao có thể dẫn đến tăng sinh quá mức hoặc bù đắp biệt hóa. Nó được khuyến khích để xác định tỷ lệ bổ sung tối ưu thông qua các thí nghiệm trước và thay thế thường xuyên môi trường mới xây dựng (thích hợp mỗi 2-3 ngày).

3. Điều chỉnh căng thẳng oxy

Các tế bào vi mạch nằm trong môi trường vi oxy thấp (1-5% O₂) trong cơ thể, và các buồng nuôi cấy thông thường (21% O₂) có thể gây ra căng thẳng oxy hóa. Có thể xem xét sử dụng một môi trường ba khí để mô phỏng điều kiện oxy sinh lý hoặc bổ sung chất chống oxy hóa để giảm thiểu thiệt hại oxy cao.

4. Tối ưu hóa gói ma trận

Các thành tế bào phụ thuộc vào các protein ma trận, và các gói collagen IV hoặc fibroconnectin được khuyến khích cho đĩa petri, nhưng cần lưu ý rằng các gói được tập trung (thường là 5-10 μg/cm²). Quá tải có thể làm thay đổi đặc tính di chuyển của tế bào.

5. Kiểm soát rủi ro ô nhiễm

Pericytes dễ bị nhiễm nguyên bào sợi và độ tinh khiết có thể được xác định định kỳ bằng cách nhuộm CD146 immunhuỳnh quang hoặc NG2. Nếu bạn phát hiện ô nhiễm, bạn có thể thử phương pháp dán tường chênh lệch hoặc phân loại dòng chảy để tinh khiết.

6. Làm mịn hoạt động truyền thừa

Khi tiêu hóa đề nghị áp dụng nồng độ thấp (0,05%) phối hợp với ấp trứng ngắn (2 - 3 phút), kịp thời dùng môi trường nuôi cấy huyết thanh để trung hòa. Tỷ lệ truyền được kiểm soát từ 1: 2 đến 1: 3, tránh lão hóa do mật độ tế bào truyền đơn quá thấp.

7. Lưu ý về bảo quản lạnh và phục hồi

Dung dịch đông lạnh nên chứa 10% DMSO và huyết thanh nồng độ cao (ví dụ 90% FBS), lưu trữ nitơ lỏng sau khi làm mát quy trình. Việc thay đổi chất lỏng sau khi hồi sức cần được thực hiện trong vòng 24 giờ để loại bỏ DMSO còn lại.

Thông qua kiểm soát chi tiết trên, có thể nâng cao đáng kể độ chính xác của dữ liệu nghiên cứu lặp lại và chức năng của nuôi cấy tế bào chu vi. Khi các thí nghiệm tiếp theo, chẳng hạn như đồng nuôi cấy hoặc xây dựng mô hình tạo mạch, nên phát hiện đồng bộ các dấu hiệu như alpha-SMA và Desmin để xác nhận sự ổn định kiểu hình tế bào.