Bộ dụng cụ này chỉ có thể được sử dụng trong nghiên cứu khoa học và không được sử dụng trong chẩn đoán y tế.

Thực vật（Nhà máy）Name

Bộ xét nghiệm ELISA

Hướng dẫn sử dụng

Nguyên tắc phát hiện

Bộ dụng cụ sử dụng xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) bằng phương pháp bánh sandwich kép. Trong các lỗ siêu nhỏ được bọc trước bởi cơ thể propylene dialdehyde (MDA), lần lượt thêm vào cơ thể kiểm tra của mẫu vật, tiêu chuẩn, đánh dấu HRP, trải qua quá trình ủ ấm và rửa đáy. Màu sắc được tạo ra với chất nền TMB, TMB được chuyển đổi thành màu xanh dưới sự xúc tác của peroxidase và cuối cùng là màu vàng dưới tác động của axit. Độ sâu của màu sắc có mối tương quan tích cực với propylene dialdehyde (MDA) trong mẫu. Độ hấp thụ (ODvalue) được xác định ở bước sóng 450nm bằng máy đo enzyme, nồng độ mẫu được tính toán.

Phương pháp thu thập, xử lý và bảo quản mẫu

Mẫu không thể chứa natri azide (NaN3) vì nó là chất ức chế peroxidase cải ngựa (HRP).

2- Sau khi thu thập mẫu vật, tiến hành chiết xuất càng sớm càng tốt, chiết xuất theo văn hiến liên quan.

3. Chất chiết xuất thực vật hoặc các mẫu liên quan khác: xin vui lòng 1000 x g ly tâm trong 20 phút, lấy ra là có thể phát hiện.

4. Bảo quản: Nếu mẫu không được phát hiện kịp thời sau khi thu thập, vui lòng đóng gói theo liều lượng một lần, lưu trữ đông lạnh ở -20 ℃, tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại, rã đông ở nhiệt độ phòng và đảm bảo mẫu được đóng băng đồng đều.

Vật phẩm tự chuẩn bị

1. Máy đánh dấu enzyme (450nm)

2. Bộ tạo mẫu và đầu súng có độ chính xác cao: 0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

3. Hộp nhiệt độ 37 ℃

Cân nhắc hoạt động

1. Bộ dụng cụ được giữ ở 2-8 ℃, sử dụng nhiệt độ phòng phía trước để cân bằng trong 20 phút. Chất tẩy rửa cô đặc lấy ra từ tủ lạnh sẽ có kết tinh, đây là hiện tượng bình thường, nước nóng để kết tinh hòa tan sau đó mới sử dụng.

2. Các thanh không sử dụng trong thí nghiệm nên được đưa trở lại túi tự niêm phong ngay lập tức, niêm phong (sấy khô ở nhiệt độ thấp) để bảo quản.

Tiêu chuẩn S0 với nồng độ 0 có thể được coi là đối chiếu âm tính hoặc trống; Khi thao tác theo hướng dẫn sử dụng, mẫu đã pha loãng 5 lần, kết quả cuối cùng nhân với 5 mới là nồng độ thực tế của mẫu.

4. Thực hiện thao tác ôn dục theo đúng thời gian, lượng dịch và thứ tự ghi rõ trong bản hướng dẫn.

5. Lắc đều trước khi sử dụng tất cả các thành phần lỏng.

Thành phần Kit

Lưu ý: Nồng độ hàng tiêu chuẩn (S0-S5) theo thứ tự là: 0, 0,75, 1,5, 3, 6, 12 nmol/ml

Chuẩn bị thuốc thử

20 × pha loãng bộ đệm rửa: nước cất được pha loãng theo tỷ lệ 1: 20, tức là 20 × bộ đệm rửa cho 1 phần cộng với 19 phần nước cất.

Phương pháp rửa tấm

1. Tấm rửa bằng tay: Vứt bỏ chất lỏng bên trong lỗ, đổ đầy chất lỏng rửa cho mỗi lỗ, sau khi ngồi 1 phút, vứt bỏ chất lỏng bên trong lỗ, vỗ khô trên giấy thấm, làm sạch tấm 5 lần.

2. Máy rửa bảng tự động: mỗi lỗ tiêm lotion 350 μL, ngâm 1 phút, rửa bảng 5 lần.

Các bước hoạt động

1. Loại bỏ các thanh mong muốn từ túi nhôm sau khi cân bằng nhiệt độ phòng 20 phút, các thanh còn lại được niêm phong bằng túi tự niêm phong và đặt trở lại 4 ℃.

2. Thiết lập lỗ sản phẩm tiêu chuẩn và lỗ mẫu, mỗi lỗ sản phẩm tiêu chuẩn thêm nồng độ khác nhau của sản phẩm tiêu chuẩn 50μL;

3. lỗ mẫu đầu tiên thêm mẫu được kiểm tra 10μL, sau đó mẫu pha loãng 40μL; Lỗ trắng không thêm vào.

4. Ngoại trừ lỗ trống, cơ thể phát hiện 100 μL được đánh dấu bằng peroxidase cải ngựa (HRP) được thêm vào mỗi lỗ trong lỗ sản phẩm tiêu chuẩn và lỗ mẫu, lỗ phản ứng được niêm phong bằng màng niêm phong, nồi tắm nước 37 ℃ hoặc hộp nhiệt độ ổn định 60 phút.

5. Loại bỏ chất lỏng, giấy thấm nước vỗ khô, mỗi lỗ đổ đầy chất tẩy rửa, để 1 phút, vứt chất tẩy rửa, giấy thấm nước vỗ khô, lặp lại tấm giặt 5 lần (cũng có thể sử dụng máy giặt tấm).

6. Mỗi lỗ thêm chất nền A, B mỗi lỗ 50 μL, 37 ℃ tránh ánh sáng ủ 15 phút.

7. Mỗi lỗ thêm chất kết thúc 50μL, trong vòng 15 phút, xác định giá trị OD của mỗi lỗ ở bước sóng 450nm.

Kết quả đánh giá

Vẽ đường cong tiêu chuẩn: Trong bảng tính Excel, nồng độ hàng tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị OD tương ứng làm tọa độ dọc, vẽ đường cong hồi quy tuyến tính hàng tiêu chuẩn, tính toán giá trị nồng độ của từng mẫu theo phương trình đường cong.

Hiệu suất Kit

1. Độ chính xác: hồi quy tuyến tính tiêu chuẩn và hệ số tương quan nồng độ dự kiến R giá trị, lớn hơn hoặc bằng 0,9900.

2. Độ nhạy: nồng độ phát hiện thấp hơn 0,1 nmol/ml.

3. Đặc hiệu: Không phản ứng chéo với các chất tương tự cấu trúc hòa tan khác.

4. Độ lặp lại: hệ số biến đổi trong và giữa các tấm đều nhỏ hơn 15%.

5. Bảo quản: 2-8 ℃, bảo quản khỏi ánh sáng và độ ẩm.

6. Ngày hết hạn: 6 tháng

Tuyên bố miễn trừ trách nhiệm

1. Bộ dụng cụ chỉ được sử dụng cho mục đích nghiên cứu, không được sử dụng trong các thí nghiệm lâm sàng hoặc thử nghiệm trên người, nếu không tất cả các hậu quả phát sinh do người thí nghiệm chịu, công ty không chịu trách nhiệm.

2. Hoạt động theo đúng hướng dẫn, người thí nghiệm vi phạm hướng dẫn, hậu quả do người thí nghiệm chịu.