ELISA(Thử nghiệm miễn dịch liên kết enzyme) là một xét nghiệm miễn dịch có độ nhạy cao, được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu y sinh và chẩn đoán lâm sàng. Mặc dù đặc hiệu của nó, kết quả âm tính giả vẫn có thể xảy ra trong hoạt động thực tế, tức là sự hiện diện thực sự của vật liệu mục tiêu trong mẫu không được phát hiện. Điều này không chỉ ảnh hưởng đến tính chính xác của dữ liệu thực nghiệm mà còn có thể dẫn đến đánh giá khoa học hoặc lâm sàng sai. Phân tích tổng hợp, vấn đề âm tính giả chủ yếu bắt nguồn từ ba mặt sau.

Phân loại yếu tố ảnh hưởng

I. Yếu tố mẫu

Ảnh hưởng của thời kỳ cửa sổ: Sau khi nhiễm trùng2-3Nồng độ kháng thể không đủ trong tuần có thể dẫn đến âm tính giả.

Xử lý mẫu không đúng cách:

Sự tan băng lặp đi lặp lại phá hủy cấu trúc kháng thể;

Phát hiện sự can thiệp của tán huyết, lipid máu cao hoặc ô nhiễm vi khuẩn;

Sử dụng HeparinEDTAThuốc chống đông máu ức chế hoạt động của enzyme.

Hai,Các yếu tố liên quan đến thuốc thử

Chất lượng và tính phù hợp của thuốc thử là tiền đề để đảm bảo tính chính xác của thử nghiệm.

1、Vấn đề về chất lượng thuốc thử: sử dụng số không được chấp thuận, hết hạn hoặc bảo quản không đúng cách (nếu không)4Thuốc thử trong tủ lạnh, có thể làm giảm độ nhạy.

2、Phản ứng chéo tác nhân: một số đột biến (nhưVật HBVcủaSĐột biến gen) có thể làm thay đổi epitope kháng nguyên, dẫn đến các kháng thể trong các bộ dụng cụ thương mại không được xác định một cách hiệu quả, dẫn đến rò rỉ xét nghiệm.

3、Bệnh Ung Thư: Video tổng hợp báo cáo tin tức dựa trên luật sử dụng hợp lý – Fair use for news reporting ((HBIG) Có thể liên kết vớiChất HBsAgSự hình thành phức tạp ngăn cản sự phát hiện của nó。

III. Các yếu tố liên quan đến hoạt động

Quy trình hoạt động chuẩn là chìa khóa để có được kết quả đáng tin cậy.

1、Các vấn đề về mẫu: lượng mẫu không đủ, thời gian mẫu quá dài (đặc biệt là đối với mẫu dương tính yếu), hoặc bộ dịch vụ, đều có thể dẫn đến tín hiệu thấp.

2、Nhiệt độ ấm: Nhiệt độ ấm (thường là37℃) và thời gian không được kiểm soát chặt chẽ, sẽ ảnh hưởng đến hiệu quả liên kết kháng thể kháng nguyên.

3、Vấn đề rửa đĩa: Rửa đĩa quá nhiều lần hoặc quá mạnh có thể dẫn đến mất các phức hợp miễn dịch gắn kết.

4、Kết xuất màu sắc và phán đoán: thời gian kết xuất màu quá ngắn, mẫu có độ chuẩn thấp có thể không kết xuất màu; Việc đọc bước sóng kép không được sử dụng có thể làm tăng nhiễu nền, dẫn đến dương tính yếu bị đánh giá sai là âm tính. 。

IV. Rối loạn nội sinh

Các chất không đặc hiệu như yếu tố thấp khớp, bổ thể và các chất khác liên kết với kháng thể, dẫn đến dương tính giả hoặc âm tính giả;

Bệnh nhân bị ức chế miễn dịch, chẳng hạn như AIDS, không sản xuất đủ kháng thể.

V. Nguyên nhân khác

Đột biến gen ảnh hưởng đến vị trí gắn kháng thể;

Giới hạn phương pháp phát hiện (ví dụ:ELISAĐộ nhạy (

đề nghị

Để tránhELISAÂm tính giả, các biện pháp sau đây được khuyến nghị:

1、Đối với các mẫu nghi ngờ dương tính mạnh, pha loãng gradient được thực hiện trước khi phát hiện để loại trừ hiệu ứng móc.

2、Bộ dụng cụ hai bước được ưu tiên vì nó ít bị ảnh hưởng bởi các hiệu ứng móc.

3、Thực hiện đúng theo hướng dẫn để đảm bảo cân bằng thuốc thử, thời gian ủ ấm và quy trình rửa tấm được chuẩn hóa.

4、Đối với các kết quả quan trọng hoặc âm tính nhưng rất nghi ngờ về mặt lâm sàng, nên kết hợp với các xét nghiệm khác (ví dụ:PCR) Kiểm tra lại.

Bằng cách hiểu các yếu tố này và thực hiện các biện pháp phòng ngừa thích hợp, có thể giảmELISAKết quả âm tính giả trong thí nghiệm.