1.2.1Cấu trúc của kháng thể

Kháng thể là globulin miễn dịch có thể liên kết đặc hiệu với kháng nguyên(miễn dịch globulin, Ig)。IgChia làm 5 loại, tức làIgG、IgA、IgM、IgDvàIgEliên quan đến xét nghiệm miễn dịch.IgChủ yếu làIgGvàIgM。Ig2 hiệp out (L2 hiệp out (H(Tổ hợp đơn thể).IgDây xích cũng tương tự, cóκ（Kappa) vàλ（Lambda) Hai loại. Năm loạiIgCấu trúc chuỗi nặng khác nhau, điều này quyết định tính kháng nguyên của chúng cũng khác nhau.IgGvàIgMChuỗi nặng được gọi làγ（gammaChuỗi vàμ（Mu) Dây xích.

Chuỗi nặng và chuỗi nhẹNThứ tự sắp xếp axit amin của các đầu khác nhau tùy thuộc vào các kháng thể khác nhau, được gọi là vùng biến đổi, tương ứngVHvàVLĐại diện. Cả hai tạo thành vị trí liên kết kháng nguyên của kháng thể và chỉ xác định cụm với kháng nguyên tương ứng.Phối hợp, phát sinh kết hợp đặc biệt, là cơ sở kết cấu của kháng thể chuyên nhất kết hợp với kháng nguyên.

IgG2) Mễ Phất Thập Nhất Trát Thích Văn (phần 2) (Fab）。 MỗiFabTất cả đều có khả năng liên kết kháng nguyên, nhưng chỉ có mộtVị trí kết hợp kháng nguyên, là đơn giá, sau khi kết hợp với kháng nguyên không xuất hiện tụ tập hoặc lắng đọng. Một đoạn khác cho biếtFcphân đoạn, không có hoạt động kháng thể, nhưng cóIgG* Kháng nguyên.

IgGNó có thể được phân hủy bởi pepsin thành hai mảnh, mộtFabDuplex, cân bằngF（ab'）2Có thể kết hợp với hai kháng nguyên giống nhau. Đoạn khác cũng tương tự.FcSau đó bị phân hủy.Polypeptide phân tử nhỏ, không có hoạt tính sinh học.

IgMLà ngũ hợp gồm năm đơn thể, chứa 10Một chuỗi và10Một sợi xích nhẹ, có.10Giá liên kết kháng nguyên, do ảnh hưởng của vị trí không gian, chỉ biểu hiện bằng giá liên kết kháng nguyên năm.IgMTrọng lượng phân tử xấp xỉ900000，IgGTrọng lượng phân tử xấp xỉ150000。

Sau khi cơ thể bị nhiễm vi sinh vật, sinh raIgMKháng thể, sau đó tạo raIgGKháng thể. Sau một thời gian,IgMLượng kháng thể giảm dần và biến mất, trong khiIgGKháng thể có thể tồn tại lâu dài và có thể tồn tại trong nhiều năm sau khi mắc bệnh.Lâu lắm.

IgMKháng thể thường là kháng thể bảo vệ có tính miễn dịch. Do đóIgMViệc xác định kháng thể có giá trị chẩn đoán lâm sàng cao hơn đối với một số bệnh truyền nhiễm như viêm gan A. Bên phải là viêm gan A.Serum bệnh nhânIgGKháng thể vàIgMThời gian và mức độ xuất hiện của kháng thể.

1.3Phản ứng kháng nguyên

1.3.1可逆性

Quá trình mà kháng nguyên liên kết với kháng thể để tạo thành một phức hợp kháng nguyên là một sự cân bằng động với một phản ứng như:

Ag + AbAg · Ab

thuốc nhét hậu môn suppositoires (Sự thân thiệnLà một liên kết nội tại giữa kháng nguyên kháng thể, có thể sử dụng hằng số cân bằng.KGiới thiệu:

K = [Ag·Ab]／[Ag] [Ab]

Ag·AbMức độ phân ly vàKGiá trị có liên quan. Điểm liên kết kháng nguyên của kháng thể ái lực cao và cụm quyết định của kháng nguyên rất phù hợp trong cấu hình không gian, cả hai liên kết mạnh mẽ và không dễ phân ly. Phân táchKháng nguyên hoặc kháng thể sau này đều có thể duy trì cấu trúc và hoạt tính ban đầu, vì vậy có thể dùng phương pháp phân tích ái lực để tinh chế kháng nguyên hoặc kháng thể. Trong kháng huyết thanh, đặc hiệuIgGKháng thể chỉ có tổngIgGtrungMột phần cực nhỏ. Các kháng thể đặc hiệu được chiết xuất bằng phân loại ái lực, được gọi là kháng thể tinh khiết ái lực, cho kết quả tốt hơn khi áp dụng trong xét nghiệm miễn dịch.

1.3.2Zui tỷ lệ phù hợp

Xem hình số lượng phức hợp kháng nguyên hình thành kháng thể (kết tủa) được thêm vào một lượng kháng thể không đổi1-4Vùng Đất Khắc NghiệtNo Man's Land (vùng tương đương）。 Trước và sau vành đai tương đương là vành đai dư thừa kháng thể và vành đai dư thừa kháng nguyên. Nếu kháng nguyên hoặc kháng thể quá dư thừa, không có kết tủa hình thành, trong xét nghiệm miễn dịchBiểu tượng Quiet hours (hiện tượng khu vực）。 Nguyên văn: Não tử khuyết căn cân (phù hợp) Quá liều kháng nguyên được gọi là vành đai sau.postzone）。 Sử dụng phương pháp miễn dịch để xác định khángTại thời điểm ban đầu, nên có đủ lượng kháng thể trong hệ thống phản ứng, nếu không số lượng đo được sẽ nhỏ hơn nội dung thực tế và thậm chí xuất hiện âm tính giả.

1.3.3Đặc trưng

Liên kết kháng nguyên về cơ bản chỉ xảy ra giữa cụm xác định kháng nguyên của kháng nguyên và vị trí liên kết kháng nguyên của kháng thể. Vì cả hai có mối quan hệ bổ sung về cấu trúc hóa học và cấu hình không gian, kháng nguyênPhản ứng kháng thể rất đặc hiệu. mạc đường ruột muqueuses digestives (Chất HBsAg）、ethuốc nhét hậu môn suppositoires (Chất HBeAg), tọa độ&phương trình (Chất HBcAg), cùng với cùng một loại virus, nhưng chỉ liên kết với kháng thể tương ứng của nó, không phải với hai kháng thể khácPhản ứng. Sự đặc hiệu của phản ứng kháng nguyên kháng thể này cho phép xét nghiệm miễn dịch xác định một chất cụ thể trong một hợp chất protein rất phức tạp, chẳng hạn như huyết thanh, mà không cần phải tách chất đang chờ xét nghiệm trước.。

Nhưng tính đặc biệt này cũng không phải. Nếu hai hợp chất có cấu trúc giống nhau một phần, phản ứng chéo có thể xảy ra trong phản ứng kháng nguyên. Nguyên văn: Não tử khuyết căn cân (hCG), tọa độ&phương trình (LH) Tất cả được tạo ra bởiαvàβHai tiểu đơn vị, cấu trúc khác nhau ở chỗβđơn vị, và cả haiαTiểu đơn vị là cùng loại. dùnghCGMiễn dịchKháng huyết thanh thu được từ động vật có chứa khángα-hCGvà khángBê-hCGHai loại kháng thể, khángα-hCGCác kháng thể sẽ kết hợp vớiLHGiữa
αPhản ứng chéo xảy ra ở vị trí enzyme. Trong thử nghiệm lâm sàng, chẳng hạn như khánghCGKháng huyết thanh như thuốc thử chẩn đoán mang thai trong nước tiểuhCGChỉ có thể dùng chohCGThử nghiệm với nồng độ cao hơn, nếu khôngDấu vết bài tiết sinh lý vào nước tiểu của phụ nữLHSẽ có phản ứng chéo với nó. Do đó, trong chẩn đoán mang thai sớm (độ nhạy cảm nên đạt được)50 mIU / mlhCG(Trong thực tế phảiỨng dụng chỉ đúnghCGKháng đặc hiệuBê-hCGĐể tránh phản ứng giao thoa với các hormone khác.

1.3.4Nhạy cảm

Khi xác định hàm lượng của một chất nhất định trong huyết thanh, độ nhạy của phép đo màu hóa học làMg / mlMức độ, độ nhạy của phương pháp xác định phản ứng enzyme là khoảng5 ~ 10μg / mlĐộ nhạy cảm của phương pháp khuếch tán gel và phương pháp độ đục trong xét nghiệm miễn dịch tương tự như phương pháp phản ứng enzym. Đánh dấu miễn phíĐộ nhạy của xét nghiệm dịch bệnh có thể tăng lên hàng ngàn lần.Ng / mlNgang. Ví dụ, được xác định bằng phương pháp miễn dịch phóng xạ hoặc xét nghiệm miễn dịch enzymeChất HBsAgĐộ nhạy cảm của nó có thể đạt được0.1ng / ml。

1.4Ứng dụng xét nghiệm miễn dịch trong xét nghiệm lâm sàng

Vì các thành phần kháng nguyên khác nhau, bao gồm bán kháng nguyên của các phân tử nhỏ, có sẵn để chuẩn bị kháng huyết thanh hoặc kháng thể đơn dòng cụ thể, kháng thể này có thể được sử dụng làm thuốc thử để phát hiện kháng nguyên tương ứng trong mẫu vật.Do đó, phạm vi ứng dụng của xét nghiệm miễn dịch là rất rộng và có thể được sử dụng trong các xét nghiệm lâm sàng để xác định:

1）Các loại protein trong dịch thể, bao gồm protein có hàm lượng cực ít như protein giáp thai......

2）Hormone, bao gồm các hormone steroid có trọng lượng phân tử nhỏ, v.v.

3）Thuốc kháng sinh và thuốc.

4）kháng nguyên mầm bệnh,Chất HBsAg、Chất HBeAgĐợi đã.

5）Ngoài ra, kháng nguyên tinh khiết cũng có thể được sử dụng để phát hiện kháng thể trong mẫu vật, chẳng hạn như kháng nguyên.- HBsĐợi đã.

5. Xét nghiệm miễn dịch được đánh dấu

Như đã đề cập ở trên, xét nghiệm miễn dịch là một phương pháp xác định rất nhạy cảm, sau khi phản ứng kháng nguyên kháng thể trực tiếp xác định lượng mưa hoặc độ đục hình thành, độ nhạy có thể đạt được.5 ~ 10μg / mlNhưng trong các thử nghiệm lâm sàng, một số vật thể được thử nghiệm có mức độ thấp hơn nhiều trong mẫu vật, vì vậy hãy tìm cách tăng độ nhạy cảm. Xét nghiệm miễn dịch được đánh dấu làKháng nguyên hoặc kháng thể trong thuốc thử được phát hiện được đánh dấu bằng các chất có thể xác định được, tăng độ nhạy bằng cách xác định các dấu hiệu. Trong xét nghiệm miễn dịch phóng xạ và xét nghiệm miễn dịch enzyme, các dấu hiệu tương ứngĐối với các hạt nhân phóng xạ và enzyme, Zui sau đó sử dụng xác định tính phóng xạ và sức sống của enzyme để tính toán lượng chất cần kiểm tra, độ nhạy có thể tăng hàng trăm đến hàng nghìn lần so với xác định trực tiếp kết tủa. Trong đánh dấu miễn dịch,Thông thường thêm quá nhiều thuốc thử đánh dấu để đảm bảo phản ứng với vật cần kiểm tra. thuốc nhét hậu môn suppositoires (Ab^※), tọa độ&phương trình (AgVí dụ, phản ứng như sau:

Chất liệu Ag + Ab^※ AgAb^※+ Ab^※

Trong các sản phẩm phản ứng cóAgKết hợpAb^※Tự do vàAb^※ Nếu không tách rời hai vật đánh dấu, kết quả đo được sẽ là tổng của cả hai. Do đó, việc tách các dấu hiệu tự do khỏi các dấu hiệu liên kết là một bước quan trọng trong xét nghiệm miễn dịch đánh dấu. Trang chủDùng nhiều loại thủ đoạn, vật dẫn cố định là một trong số đó. Nếu kháng nguyên hoặc kháng thể được bọc trên chất mang pha rắn, sau đó phản ứng trực tiếp với kháng nguyên hoặc kháng thể được đánh dấu, các dấu hiệu liên kết được cố định trong chất mangTrên cơ thể, mà dấu hiệu tự do để lại trong dung dịch. Nó có thể được tự do bằng cách giặt.Ab^※Loại bỏ, việc xác định các dấu hiệu liên kết có thể được thực hiện trên pha rắn.

6. Xét nghiệm miễn dịch enzyme

mạc đường ruột muqueuses digestives (enzyme miễn dịch), tọa độ&phương trình (đồng nhất) Và không đồng nhất.bất đồng) Hai loại. Trong giai đoạn đồng nhấtEIATrung KhảKhông cần tiến hành phân tách các dấu hiệu tự do và kết hợp mà trực tiếp xác định các dấu hiệu. Ví dụ, trong một số điều kiện, các enzyme trong phức hợp kháng nguyên đánh dấu enzyme được hình thành sau khi phản ứng kháng nguyên bị mất.Sức sống của nó trên cơ chất, do đó sức sống enzyme đo được phản ánh trực tiếp các dấu hiệu enzyme tự do. Giai đoạn đồng nhấtEIAÍt được sử dụng trong các xét nghiệm lâm sàng. Không đồng nhấtEIATrước hết phải tự do vàSự tách biệt của các dấu hiệu liên kết. Như đã đề cập trước đó, một tàu sân bay pha rắn có thể được sử dụng như một phương tiện tách. Phương pháp xét nghiệm miễn dịch enzyme pha rắn này......1971Khi mới thành lập, nó được gọi là chất hấp thụ miễn dịch liên kết enzyme.Phương trình (thử nghiệm miễn dịch liên kết enzyme), viết tắtELISATrong nước có dịch là xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme, mặc dù hàm nghĩa không chính xác, nhưng đã được sử dụng.