Thông thường chúng ta có thể sử dụngELISAMẫu kiểm tra có nhiều loại, như huyết thanh, huyết tương, nước tiểu, tế bào nuôi cấy thanh lọc hoặc tổ chức đều đặn, phương pháp xử lý mẫu kiểm tra giai đoạn đầu không giống nhau. Xử lý đúng mẫu là đảm bảoELISACác bước kiểm tra chính xác và chính xác, sau đây xin giới thiệu sơ lược về phương pháp xử lý các loại mẫu khác nhau.

1、 Huyết thanh

Serum thường được sử dụngELISAMột loại mẫu kiểm tra, xử lý cũng tương đối đơn giản.

Lấy mẫu máu bằng ống nghiệm không có pyrogen, không có endotoxin hoặc ống ly tâm, đặt ống nghiệm hoặc ống ly tâm ở nhiệt độ phòng2giờ hoặc4Độ C qua đêm, làm cho huyết thanh tích xuất. (Đặt nghiêng ống nghiệm hoặc ống ly tâm để tăng mặt cắt ngang của bề mặt chất lỏng cho phép kết tủa huyết thanh nhiều hơn.)4℃1000×gLy tâm20phútCẩn thận thu thập. Đề nghị phân phối huyết thanh nhiều phần,-20℃ hoặc-80Bảo quản độ C, tránh đông lạnh nhiều lần.

Cần tránh tan máu trong quá trình lấy máu, vì các chất có hoạt tính peroxidase sẽ được giải phóng khi các tế bào máu đỏ phân hủy.HRPĐánh dấuELISATrong quá trình phát hiện sẽ có kết xuất màu không đặc hiệu, dẫn đến tính không chính xác của quá trình phát hiện. Đồng thời cũng nên tránh ô nhiễm vi khuẩn, vì vi khuẩn có thể chứa nội sinh trong cơ thể.HRPĐiều này dẫn đến kết quả dương tính giả.

2、 Huyết tương

Mẫu máu được thu thập bằng ống thu gom mạch máu hoặc ống ly tâm có chứa chất chống đông máu, sau khi thu thập mẫu vật30 phútnội4℃ 1000×gLy tâm15 phútLấy thanh tức huyết tương. Đem thanh lý phân phối nhiều phần,-20℃ hoặc-80Bảo quản độ C, tránh đông lạnh nhiều lần. Tránh sử dụng các mẫu máu tan hoặc lipid cao.

Thuốc chống đông máu thường được sử dụng làEDTAKhi kiểm tra, bạn cũng nên đọc kỹ hướng dẫn sử dụng bộ thuốc thử, kiểm tra xem bộ thuốc thử có yêu cầu đặc biệt đối với thuốc chống đông máu hay không.

3、 nuôi cấy tế bào sạch

Lấy tế bào nuôi cấy thượng thanh đến ống ly tâm,1000×gLy tâm20 phútLoại bỏ các mảnh vỡ tế bào và tạp chất.-20℃ hoặc-80Bảo quản độ C, tránh đông lạnh nhiều lần.

4、 Chất lỏng lysis tế bào

1） Hút môi trường bên trong đĩa nuôi cấy, dùng enzym tụy tiêu hóa tế bào, thêm một lượng vừa phải môi trường nuôi cấy thổi tế bào ra khỏi đĩa nuôi cấy. Các tế bào lơ lửng có thể được bỏ qua.

2） thu thập đình chỉ tế bào,1000×gLy tâm10 phútBỏ đi. Dùng cái lạnh.PBSTrang chủ3Lần sau.

3） Thêm một lượng vừa phải pre-coldPBSHoặc dịch lysis tế bào (thêm chất ức chế protease trước khi sử dụng) treo lại các tế bào. Thông thường6Số lượng tế bào cần một lỗ150~250μL PBSTrọng huyền.

4） Đặt mẫu vào-20℃ hoặc-80Độ C, làm cho mẫu đông lạnh, rồi đặt mẫu đông lạnh ở nhiệt độ phòng, đông lạnh nhiều lần, làm cho tế bào phân giải đầy đủ. Các mẫu cũng có thể được siêu âm phá vỡ để đạt được mục đích cracking.

5） 4℃10000 × gLy tâm10 phútLoại bỏ các mảnh vỡ tế bào, lấy ra.-20℃ hoặc-80Bảo quản độ C, tránh đông lạnh nhiều lần.

5Tổ chức đều đặn.

1） Dùng mẫu môPBS (0,01)M, PH 7,4）Rửa sạch, rửa sạch máu hoặc tạp chất còn lại trên bề mặt mô.

2） Cân khối mô, cắt nhỏ sau khi ghi lại, các mảnh nên càng nhỏ càng tốt, thuận tiện cho việc san lấp mặt bằng đầy đủ hơn

3） Thêm tổ chức vào một tỷ lệ nhất định trước khi làm mátPBS(trước khi sử dụng thêm chất ức chế protease) San lấp mặt bằng, đặt trên băng hoặc trong bồn tắm đá khi san lấp mặt bằng. (Thông thường theo trọng lượng mô:PBSKhối lượng=1:9Tỷ lệ cân bằng, ví dụ:Từ 1gCác mẫu mô tương ứng9 mLcủaPBSKhối lượng cụ thể có thể được điều chỉnh thích hợp theo nhu cầu thí nghiệm, sau khi phát hiện nồng độ mẫu nên được nhân với bội số pha loãng tương ứng)

4） Hấp thụ dung dịch đều đặn đến ống ly tâm,4℃5000xgLy tâm5 ~ 10 phútLấy sạch.-20℃ hoặc-80Bảo quản độ C, tránh đông lạnh nhiều lần.

6、 Các mẫu sinh học lỏng khác như nước tiểu, nước bọt

1000 × gLy tâm20 phútLấy ra là có thể kiểm tra đo lường.

Nói chung, vìELISAChỉ có thể phát hiện hàm lượng protein hòa tan, vì vậy tất cả các mẫu phải được đảm bảo là chất lỏng rõ ràng, lượng mưa hoặc chất lơ lửng nên được loại bỏ ly tâm.

Để đảm bảo tính chính xác của việc kiểm tra, lưu-20℃ hoặc-80Mẫu ℃ trong1~6Kiểm tra trong vòng một tháng;4℃ Các mẫu được bảo quản nên được tìm thấy trong1Kiểm tra trong tuần.

Ngoài ra, cần đảm bảo mẫu không chứaNaN₃bởi vìNaN₃Sẽ ức chế.HRPHoạt tính, từ đó dẫn đến kết quả âm tính giả.