Trong khoa học đời sống, chẩn đoán lâm sàng và dược phẩm sinh học, phân tích định lượng và định tính chính xác và hiệu quả của các phân tử mục tiêu là rất quan trọng. Trong số này, xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) đã trở thành công nghệ tiêu chuẩn vàng không thể thiếu trong phòng thí nghiệm với độ nhạy, độ đặc hiệu và khả năng thông lượng cao của droyue. Sự ra đời của bộ dụng cụ ELISA đã chuẩn hóa và đơn giản hóa quy trình vận hành của công nghệ phức tạp này, giúp các nhà nghiên cứu và kiểm tra lâm sàng dễ dàng có được kết quả đáng tin cậy.

Nguyên tắc cốt lõi của ELISA: Liên kết đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể

Nguyên tắc cơ bản của ELISA là sử dụng phản ứng miễn dịch đặc hiệu cao giữa kháng nguyên và kháng thể, khuếch đại và phát hiện tín hiệu thông qua các dấu enzyme. Nói một cách đơn giản, giống như một chiếc chìa khóa chỉ có thể mở một ổ khóa, một kháng thể thường chỉ nhận ra và liên kết với một kháng nguyên cụ thể.

Tùy thuộc vào mục tiêu và phương pháp phát hiện, ELISA chủ yếu có các loại sau:

1. Elisa trực tiếp

Nguyên tắc: Kháng nguyên được thử nghiệm được hấp phụ trực tiếp vào một chất mang pha rắn, chẳng hạn như tấm 96 lỗ, sau đó liên kết với kháng nguyên đặc hiệu được đánh dấu bởi enzyme. Sau khi rửa sạch các kháng thể không liên kết, các chất nền enzyme được thêm vào để tạo ra tín hiệu.

Tính năng: Ít bước hoạt động, nhanh, nhưng tín hiệu có thể yếu và mỗi chất được thử nghiệm cần một kháng thể nhãn enzyme cụ thể.

2. Elisa gián tiếp

Nguyên tắc: Gói kháng nguyên được đặt trên bảng, trước tiên thêm một kháng nguyên không được đánh dấu để liên kết với kháng nguyên, sau đó thêm một kháng nguyên được đánh dấu bởi enzyme (nhận ra kháng thể kháng nguyên) để liên kết. Cuối cùng thêm màu nền vào.

Đặc điểm: hiệu ứng khuếch đại tín hiệu hiển thị zhu (một kháng có thể được kết hợp với nhiều kháng hai), độ nhạy cao, tính linh hoạt cao (cùng một nguồn gốc của một kháng có thể được sử dụng cùng một loại enzyme kháng hai phát hiện), là một trong những phương pháp được sử dụng nhiều nhất.

3. Bánh sandwich Elisa

Nguyên lý: Đây là phương pháp nhạy cảm và đặc hiệu nhất để phát hiện kháng nguyên protein. Đầu tiên, một gói "kháng thể bắt" được sử dụng bởi một tấm enzyme để bắt kháng nguyên mục tiêu trong mẫu. Một "kháng thể phát hiện" khác sau đó được thêm vào để liên kết với một epitope khác của kháng nguyên, tạo thành cấu trúc bánh sandwich của "kháng thể - kháng nguyên - kháng thể". Kháng thể phát hiện có thể được đánh dấu bằng enzyme (phương pháp trực tiếp) hoặc được phát hiện bằng enzyme dikháng (phương pháp gián tiếp).

Tính năng: Độ nhạy cao, đặc hiệu mạnh, thích hợp cho việc phát hiện kháng nguyên nồng độ thấp trong các mẫu phức tạp (ví dụ: huyết thanh, nuôi cấy tế bào). Phần lớn các bộ dụng cụ ELISA thương mại ở định dạng này.

4. Cạnh tranh với ELISA

Nguyên tắc: Chủ yếu được sử dụng để phát hiện kháng nguyên phân tử nhỏ (bán kháng nguyên). Các kháng nguyên được thử nghiệm trong mẫu cạnh tranh với một lượng kháng nguyên enzyme đã biết để liên kết các kháng thể với liang hạn chế. Nồng độ kháng nguyên được thử nghiệm trong mẫu càng cao, kháng nguyên enzyme liên kết với kháng thể càng ít và tín hiệu cuối cùng được tạo ra càng yếu.

Tính năng: Cường độ tín hiệu tỷ lệ nghịch với nồng độ của vật cần đo, thích hợp để phát hiện các chất phân tử nhỏ (ví dụ như hormone, thuốc).

Phát hiện tín hiệu: Dù ở dạng nào, cuối cùng bạn cần thêm chất nền enzyme. Các enzyme thường được sử dụng là peroxidase cải ngựa (HRP) và phosphatase kiềm (AP). Chất nền phản ứng với xúc tác của enzyme để tạo ra các sản phẩm có màu. Độ sâu của màu sắc tỷ lệ thuận với nồng độ của phân tử mục tiêu trong mẫu và bằng cách xác định giá trị hấp thụ bằng máy đo enzyme, đường cong tiêu chuẩn có thể được vẽ và nồng độ chính xác của mẫu được đo có thể được tính toán.

II. Kịch bản ứng dụng rộng rãi của bộ dụng cụ ELISA

Tính linh hoạt của bộ ELISA làm cho nó tỏa sáng trong nhiều lĩnh vực:

Chẩn đoán lâm sàng:

Xét nghiệm bệnh truyền nhiễm: phát hiện kháng thể virus (ví dụ: HIV, viêm gan B, viêm gan C), hoặc kháng nguyên.

Giám sát mức độ hormone: xác định insulin, hormone tuyến giáp, hormone giới tính, v.v.

Sàng lọc dấu ấn khối u: phát hiện AFP (alpha-fetoprotein), CEA (kháng nguyên phôi ung thư), PSA (kháng nguyên đặc hiệu tuyến tiền liệt), v.v.

Chẩn đoán bệnh tự miễn: phát hiện yếu tố thấp khớp, tự kháng thể, v.v.

Nghiên cứu khoa học đời sống:

Nghiên cứu cytokine và con đường tín hiệu: phân tích định lượng mức độ biểu hiện cytokine như IL-6, TNF-alpha, IFN-gamma.

Nghiên cứu biểu hiện protein và tương tác.

Phát triển thuốc và đánh giá dược lực: phát hiện nồng độ thuốc trong cơ thể và tác động của nó đối với các dấu ấn sinh học.

An toàn thực phẩm và kiểm dịch động vật:

Kiểm tra chất gây dị ứng: Phát hiện các chất gây dị ứng như đậu phộng, gluten trong thực phẩm.

Xét nghiệm độc tố: chẳng hạn như aflatoxin.

Kiểm tra dư lượng thuốc thú y.

Chẩn đoán bệnh động vật và thực vật.

B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)

Bộ dụng cụ ELISA thương mại cung cấp tất cả các tác nhân cần thiết và protocol được tối ưu hóa và thường chứa các bước quan trọng sau:

Chuẩn bị trước khi thử nghiệm:

Lấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh và khôi phục tất cả các tác nhân về nhiệt độ phòng (khoảng 30 phút).

Chuẩn bị sẵn sàng cho các mẫu, tiêu chuẩn và kiểm soát chất lượng.

Phối chế tốt dịch tẩy rửa cần thiết, dịch làm việc phát hiện kháng thể......

Quy trình hoạt động:

B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)

Bao bì: Thêm kháng thể bắt vào lỗ tiêu chuẩn enzym, ôn dục trong điều kiện thích hợp, để kháng thể hấp phụ vào thành lỗ.

Rửa: Loại bỏ chất lỏng và rửa tấm lỗ bằng dung dịch rửa nhiều lần để loại bỏ các kháng thể không liên kết.

Đóng cửa: Thêm chất lỏng khép kín (ví dụ BSA, sữa tách béo) và lấp đầy các vị trí lỗ không bị kháng thể chiếm giữ, ngăn chặn sự hấp phụ không đặc hiệu trong các bước tiếp theo, làm giảm nền.

2. Thêm mẫu và ôn dục:

Một loạt các sản phẩm tiêu chuẩn, các mẫu cần kiểm tra và các sản phẩm kiểm soát chất lượng đã biết về tập trung lần lượt được thêm vào các lỗ.

Niêm phong tấm lỗ và giữ ấm ở nhiệt độ được chỉ định trong một khoảng thời gian nhất định, để kháng nguyên mục tiêu bị bắt bởi kháng thể bẫy.

3. Rửa:

Bỏ đi chất lỏng trong lỗ, dùng chất tẩy rửa đổ đầy các lỗ, để yên một lát rồi bỏ đi, lặp lại 3 - 5 lần. Bước này rất quan trọng và có thể loại bỏ hoàn toàn các chất không liên kết và là chìa khóa để đạt được nền thấp và tỷ lệ nhiễu cao.

4. Thêm kháng thể xét nghiệm:

Các kháng thể thử nghiệm được đánh dấu bằng enzyme được thêm vào mỗi lỗ. Kháng thể này liên kết với một epitope khác của kháng nguyên mục tiêu đã bị bắt để tạo thành một cấu trúc bánh sandwich.

Ôn sinh một lần nữa, sau đó rửa để loại bỏ các kháng thể phát hiện không liên kết.

5. Thêm dung dịch cơ sở:

Thêm một dung dịch chất nền enzyme tươi (như TMB) vào mỗi lỗ. Tránh ánh sáng trong bóng tối, các enzyme xúc tác phản ứng với chất nền để tạo ra các sản phẩm màu xanh (đối với TMB).

6. Kết thúc phản ứng và đọc:

Kết thúc (như axit sulfuric) được thêm vào, phản ứng dừng lại ngay lập tức và màu sắc của dung dịch chuyển sang màu vàng từ màu xanh lam.

Trong một thời gian ngắn sau khi phản ứng dừng lại (thường là trong vòng 30 phút), độ hấp thụ (giá trị OD) trên mỗi lỗ được đo bằng máy đo enzyme ở bước sóng cụ thể, chẳng hạn như 450nm đối với TMB.

7. Phân tích dữ liệu:

Lấy nồng độ của sản phẩm tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị OD tương ứng là tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn.

Nồng độ chính xác của kháng nguyên mục tiêu trong mẫu có thể được tính toán bằng cách thay thế giá trị OD của mẫu cần đo vào đường cong tiêu chuẩn.

Tại sao chọn bộ dụng cụ ELISA của chúng tôi?

Độ nhạy cao so với dải động rộng: nồng độ thấp đến mức pg/mL có thể được phát hiện và bao phủ một phạm vi tuyến tính rộng.

Tính đặc hiệu của Droyue: Kháng thể chất lượng cao đã được chứng minh nghiêm ngặt, đảm bảo phản ứng chéo rất thấp.

Độ lặp lại tuyệt vời: sự khác biệt nhỏ giữa các lô và giữa các lô, đảm bảo kết quả thử nghiệm ổn định và đáng tin cậy.

Thao tác đơn giản và nhanh chóng: Cung cấp tấm chăn bọc sẵn, thuốc thử sẵn sàng sử dụng và hướng dẫn chi tiết, rút ngắn đáng kể thời gian thí nghiệm.

Dòng sản phẩm hoàn chỉnh: bao gồm nhiều chi và nhiều mục tiêu để đáp ứng nhu cầu nghiên cứu đa dạng của bạn.

Là một công cụ phát hiện sinh học trưởng thành, hiệu quả và nhạy cảm, ELISA Kit đã trở thành nền tảng của việc định lượng và phân tích protein trong các phòng thí nghiệm hiện đại. Cho dù đó là nghiên cứu khoa học tiên tiến hay chẩn đoán lâm sàng chính xác, nó cung cấp hỗ trợ dữ liệu đáng tin cậy. Chọn một bộ dụng cụ ELISA chất lượng cao là bước đầu tiên để thử nghiệm của bạn thành công.

Chào mừng bạn đến với công ty chúng tôi để tìm bộ dụng cụ ELISA phù hợp với mục tiêu nghiên cứu của bạn. Bất kỳ câu hỏi kỹ thuật, xin vui lòng liên hệ với đội ngũ hỗ trợ kỹ thuật của chúng tôi.