Chất lượng của mẫu tế bào có liên quan trực tiếp đến độ tin cậy và khả năng lặp lại của kết quả thí nghiệm. Shanghai Koborui Biology sẽ giới thiệu hệ thống cho bạn những điểm cốt lõi của việc chuẩn bị và bảo quản mẫu tế bào, cung cấp cho các nhà nghiên cứu một tài liệu tham khảo hoạt động tiêu chuẩn, đảm bảo rằng các mẫu tế bào được bảo quản ở trạng thái jia nhất, duy trì các đặc tính sinh học và giá trị thực nghiệm của chúng.
I. Các bước chính để chuẩn bị mẫu tế bào
1. Chuẩn bị trước khi chuẩn bị
- Thiết kế thí nghiệm rõ ràng: xác định sơ đồ chuẩn bị dựa trên các mục đích thí nghiệm tiếp theo (ví dụ: proteomics, transcriptomics, nuôi cấy tế bào, v.v.)
- Chuẩn bị thuốc thử và vật tư tiêu hao: tất cả các chất thử, vật tư tiêu hao tiếp xúc với tế bào cần vô trùng, không nhiễm nuclease/protease
- Thiết bị làm lạnh trước: rôto ly tâm, ống lưu trữ đông lạnh, v.v. được làm lạnh trước đến nhiệt độ thích hợp
2. Thu thập và xử lý tế bào
- Xác nhận trạng thái tế bào: đảm bảo tế bào đang trong giai đoạn tăng trưởng logarit, tỷ lệ tế bào sống>95%
- Xử lý nhẹ nhàng: Tránh thổi mạnh, rửa bằng PBS hoặc nước muối sinh lý trước khi làm lạnh
- Xử lý kịp thời: Xử lý càng sớm càng tốt sau khi lấy ra khỏi môi trường nuôi cấy, giảm phản ứng căng thẳng tế bào
3. Yêu cầu xử lý đặc biệt
- Mẫu phân tích protein: Thêm hỗn hợp chất ức chế protease để tránh đông lạnh lặp đi lặp lại
- Phân tích mẫu axit nucleic: sử dụng vật tư không RNase/DNase, thêm chất bảo vệ RNA
- Mẫu chuyển hóa: làm nguội nhanh hoạt động trao đổi chất, sử dụng methanol làm lạnh trước hoặc làm nguội đặc biệt
Phương pháp bảo quản và lựa chọn tế bào
1. Bảo quản ngắn hạn (<24 giờ)
- Bảo quản 4 ℃: lơ lửng trong môi trường hoàn thiện hoặc đệm
- Ứng dụng: Các thí nghiệm như Flow Cell, Live Cell Imaging được thực hiện trong ngày
- Thận trọng: tránh ô nhiễm vi khuẩn, bảo quản kín
2. Bảo quản trung hạn (1 tuần - 1 tháng)
--80 ℃ Bảo quản: Thêm chất bảo vệ đông lạnh thích hợp
- Dung dịch đông lạnh được đề nghị:
- Nuôi cấy tế bào: Huyết thanh bò thai với 10% DMSO
- Phân tích protein: dung dịch lysis với chất ức chế protease
- Phân tích axit nucleic: thuốc thử bảo vệ RNA (như TRIzol hoặc bảo quản đặc biệt)
3. Bảo quản lâu dài (>1 tháng)
- Bảo quản nitơ lỏng (-196 ℃): Phương pháp tốt nhất để duy trì hoạt động tế bào
- Thủ tục đông lạnh:
```
1. Làm mát chương trình: 4 ℃ 30 phút → -20 ℃ 2 giờ → -80 ℃ qua đêm
2. Chuyển sang pha nitơ lỏng (-150 ℃) Bảo quản lâu dài
```
- Lựa chọn ống đông lạnh: thông tin tế bào được đánh dấu, ngày đông lạnh, số lần truyền, nhà điều hành
III. Điểm kiểm soát chất lượng
1. Kiểm tra hoạt động tế bào
- Kiểm tra màu xanh dương hoặc MTT trước và sau khi đóng băng
- Hoạt động của tế bào nên>80% sau khi hồi sức (lý tưởng>90%)
2. Kiểm soát ô nhiễm
- Thường xuyên kiểm tra ô nhiễm Mycoplasma
- Vi khuẩn, nấm ô nhiễm mắt thường và nội soi
- Xác định STR ô nhiễm chéo tế bào
3. Đánh dấu và ghi lại
- Mã QR hoặc hệ thống quản lý mã vạch
- Ghi lại chi tiết nguồn gốc tế bào, quá trình xử lý, vị trí bảo quản
IV. Giải pháp cho các vấn đề thường gặp
Nguyên nhân có thể là giải pháp
Hoạt động tế bào thấp sau khi hồi sức quá trình đông lạnh hạ nhiệt quá nhanh sử dụng hộp làm mát chương trình
Không đủ chất ức chế protease Thêm nhiều hỗn hợp ức chế protease
Phân hủy RNA Ô nhiễm RNase trong quá trình vận hành Sử dụng vật tư tiêu hao không có RNase, xử lý nhanh
Ô nhiễm Mycoplasma | Ô nhiễm tế bào nguyên thủy hoặc ô nhiễm hoạt động | Kiểm tra thường xuyên, sử dụng chất tẩy tế bào mycoplasma |
V. Lưu ý an toàn
1. An toàn sinh học: tuân thủ các yêu cầu về mức độ an toàn sinh học tương ứng theo nguồn tế bào
2. Hoạt động nitơ lỏng: đeo mặt nạ bảo vệ và găng tay để ngăn ngừa tê cóng
3. An toàn hóa học: DMSO và các tác nhân khác được xử lý đúng cách để tránh tiếp xúc trực tiếp với da
4. Xử lý chất thải: Chất thải tế bào được xử lý theo quy trình xử lý vật liệu nguy hiểm sinh học
Đề xuất tổng hợp phương án bảo quản
| Hướng dẫn áp dụng | Phương pháp bảo quản được đề xuất | Nhiệt độ bảo quản | Thời gian bảo quản dự kiến |
Nuôi cấy hồi sức tế bào | DMSO+Serum Freeze | Nitơ lỏng | Hơn 10 năm |
| Western Blot | RIPA Cracking | -80 ℃ | 1 năm |
| Khai thác RNA | TRIZOL hoặc RNA protector | 80 ℃ | 6 tháng |
| Metabolic | 80% Methanol dập tắt | -80 ℃ | 3 tháng |
PBS với 2% FBS | 4 ℃ | 24 giờ |
VII. Hệ thống quản lý thông minh
Phòng thí nghiệm được khuyến nghị thiết lập một hệ thống quản lý điện tử mẫu tế bào, bao gồm:
- Theo dõi vị trí mẫu theo thời gian thực
- Bản ghi Freeze/Remove được cập nhật tự động
- Kiểm tra và nhắc nhở hàng tồn kho thường xuyên
- Truy xuất nhanh thông tin mẫu

Các mẫu tế bào chất lượng cao là nền tảng cho sự thành công của thí nghiệm. Tính toàn vẹn sinh học của mẫu tế bào có thể được duy trì ở mức tối đa bằng cách tiêu chuẩn hóa các quy trình chuẩn bị và phương pháp bảo quản khoa học. Với sự phát triển của các công nghệ mới như phân tích đơn bào và phiên mã không gian, các yêu cầu về chất lượng mẫu tế bào sẽ được nâng cao hơn nữa. Việc thiết lập các quy tắc quản lý mẫu nghiêm ngặt không chỉ là sự cần thiết để đảm bảo độ tin cậy của các thí nghiệm hiện tại mà còn là sự đầu tư chiến lược để bảo tồn tài nguyên sinh học có giá trị cho các nghiên cứu trong tương lai.