MTS Tế bào tăng sinh và Bộ xét nghiệm độc tính tế bào

Tên Trung Quốc:MTS Tế bào tăng sinh và Bộ xét nghiệm độc tính tế bào

Tên sản phẩm:MTS Cell Proliferation and Cytotoxicity Detection Kit

Thông số kỹ thuật sản phẩm: 500 lần
Mã sản phẩm: BJ-01X6321

MTS là một hợp chất methylene mới và là một dẫn xuất tetrazoni của MTT. MTS có thể bị thoái hóa bởi enzyme ti thể dehydrogenase trong tế bào sống để tạo ra mene hòa tan trong nước màu nâu vàng, bằng cách xác định sự hấp thụ phổ của mene, từ đó có thể xác định tình trạng tăng sinh của tế bào.

Quy trình hoạt động nuôi cấy tế bào:
1. Chuẩn bị cơ sở đào tạo và bồi dưỡng điều kiện đông lạnh:
1) Chuẩn bị môi trường F-12K; Huyết thanh bò thai chất lượng cao, 10%; Kháng gấp đôi, 1%.
2) Điều kiện nuôi: pha khí: không khí, 95%; CO2, 5%. Nhiệt độ: 37 ℃, độ ẩm buồng nuôi cấy là 70% -80%.
3) Dung dịch đông lạnh: 90% huyết thanh, 10% DMSO, được sử dụng ngay bây giờ.
2. Xử lý tế bào:
1) Tế bào hồi sức: Nhanh chóng đặt ống chứa 1 mL đình chỉ tế bào vào bồn tắm nước 37 ℃ (mặt nước phải thấp hơn nắp ống) lắc tan băng, di chuyển vào ống ly tâm 15ml đã chuẩn bị trước có chứa 4 mL môi trường trộn đều. Ly tâm trong điều kiện 1000RPM trong 4 phút, loại bỏ chất lỏng, thêm vào môi trường 1mL và thổi đều. Tất cả đình chỉ tế bào sau đó được chuyển vào một chai nuôi cấy có chứa 5ml môi trường để nuôi cấy qua đêm. Thay dịch vào ngày hôm sau và kiểm tra mật độ tế bào.
2) Di truyền tế bào: Nếu mật độ tế bào đạt 80% -90%, nuôi cấy di truyền có thể được thực hiện.

Phương pháp nuôi cấy tế bào:
1, di truyền tế bào: có thể di truyền khi mật độ tế bào đạt 80-90%
① Bỏ đi bồi dưỡng thượng thanh, dùng PBS hoặc nước muối rửa 1-2 lần;
② Thêm 2ml 0,25% (chai T25), để phủ toàn bộ chai hoặc đĩa, đậy lại và đưa vào hộp nuôi cấy để tiêu hóa;
③ Sau 1-2 phút, các tế bào được quan sát dưới kính hiển vi, nếu hầu hết các tế bào co lại và một số lượng nhỏ các tế bào rơi ra, nhẹ nhàng thổi để xác nhận tiêu hóa sau khi thêm * môi trường để chấm dứt tiêu hóa; Nếu tế bào vẫn dán vào tường, đặt lại hộp nuôi cấy tiếp tục tiêu hóa đến khi có thể nhẹ nhàng thổi xuống mới thôi;
④ Đình chỉ tế bào 1000RPM xung quanh điều kiện ly tâm 4 phút, loại bỏ;
⑤ Sau khi treo lại với môi trường tươi, thêm vào chai hoặc đĩa, chai T25 cộng với 6-8ml môi trường;
⑥ Các tế bào lơ lửng được thu thập trực tiếp bằng ly tâm, lượng mưa tế bào sau khi treo lại được chia vào chai nuôi cấy mới.
2. Tế bào phục hồi:
a) Nhanh chóng lắc và tan chảy ống lưu trữ đông lạnh trong nước ấm 37 độ C, thời gian khoảng 1 phút, trộn đều với 4 - 5 ml môi trường.
② Trong điều kiện xung quanh 1000RPM ly tâm 4 phút, bỏ đi thanh lọc, thêm 1-2ml môi trường thổi đều, thêm huyền dịch tế bào vào chai, bổ sung một lượng vừa phải môi trường.
Tế bào đông lạnh: Khi tế bào phát triển trong tình trạng tốt sẽ tiến hành bảo tồn tế bào đông lạnh
① Bỏ qua nuôi cấy thượng thanh, dùng PBS hoặc nước muối rửa 1-2 lần, thêm 1 mL 0,25% (chai T25)
② Sau 1-2 phút, các tế bào được quan sát dưới kính hiển vi, hầu hết các tế bào co lại và một số lượng nhỏ các tế bào rơi ra, nhẹ nhàng thổi để xác nhận tiêu hóa sau khi thêm * môi trường để chấm dứt tiêu hóa;
③ Ly tâm trong điều kiện xung quanh 1000RPM đình chỉ tế bào, bỏ đi, cộng với 1ml tế bào đình chỉ đông lạnh;
④ Đặt ống lưu trữ đông lạnh vào hộp làm mát chương trình, đặt nó vào tủ lạnh -80 ℃, sau 4 giờ chuyển ống lưu trữ đông lạnh vào bể nitơ lỏng để lưu trữ.

TM3 (tế bào trung mô tinh hoàn chuột) 5 × 106cells/lọ × 2

TSCCa (tế bào ung thư vảy lưỡi người) 5 × 106cells/lọ × 2

U-2 OS (tế bào sarcoma xương người) 5 × 106cells/lọ × 2

U251 (tế bào u đệm người) 5 × 106cells/lọ × 2

U-87 MG (tế bào thần kinh đệm ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

U-937 (tế bào lympho tế bào mô người) 5 × 106cells/lọ × 2

V79 (tế bào phổi hamster) 5 × 106cells/lọ × 2

VCaP (tế bào ung thư tuyến tiền liệt ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

Vero (tế bào thận khỉ xanh châu Phi) 5 × 106cells/lọ × 2

WI-38 (tế bào phổi phôi người) 5 × 106cells/lọ × 2

WISH (tế bào màng ối người) 5 × 106cells/lọ × 2

Y1 (Y-1) (tế bào vỏ thượng thận chuột) 5 × 106cells/lọ × 2

YAC-1 (tế bào u lympho chuột) 5 × 106cells/lọ × 2

ZR-75-1 (tế bào ung thư vú ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

ZR-75-30 (tế bào ung thư vú ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

16HBE (tế bào biểu mô phế quản ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

801-D (tế bào ung thư phổi tế bào khổng lồ ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

A2 (tế bào ung thư nang giống người) 5 × 106cells/lọ × 2

A-427 (tế bào ung thư phổi ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

A-498 (tế bào ung thư thận người) 5 × 106cells/lọ × 2

A875 (tế bào khối u ác tính ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

Kháng thể Alpha/Beta Hydrolase Protein 3 cho phổi

Adenosine Triphosphate ràng buộc hộp vận chuyển F tiểu đơn vị 3 kháng thể

Adenosine triphosphate ràng buộc hộp vận chuyển A tiểu đơn vị 5 kháng thể

Kháng thể protein ADCK1

Acyl liên kết domain protein 4 kháng thể

Kháng thể Alpha/Beta Hydrolase 4

Kháng thể protein ADCK2

Acetaldehyde dehydrogenase 16 Kháng thể A1 tại nhà

Phân tử dính IgG Giống như miền Protein 3 Kháng thể

Kháng thể ethanol dehydrogenase 1

Kháng thể delta aminoacetylpropionate dehydrase

Kháng thể Protein 4 liên quan đến xơ cứng cơ bên

Kháng thể Megaglobulin Alpha 2

Kháng thể protein ACCSL

Kháng thể alpha-fetoprotein

Beta amyloid tiền chất protein ràng buộc protein 3 kháng thể

Kháng thể actin sao

Kháng thể TREX1 protein liên quan đến lupus ban đỏ hệ thống

Phosphate hóa kháng thể Trex1 với lupus ban đỏ hệ thống

Phosphate hóa kháng thể Trex1 protein liên quan đến lupus ban đỏ hệ thống

MTS Tế bào tăng sinh và Bộ xét nghiệm độc tính tế bàoPhức hợp protein liên quan đến đầu AP-2μ Chuỗi 1 Kháng thể

Phức hợp protein liên quan đến phosphoryl hóa AP-2μ Chuỗi 1 Kháng thể

Kháng thể dính màng 7

Quy trình hoạt động
1, thêm tế bào 100 μL/lỗ trong 96 lỗ, thông thường thí nghiệm tăng sinh tế bào thêm 100 microliter 2000 tế bào mỗi lỗ, thí nghiệm độc tế bào thêm 100 microliter 5000~10.000 tế bào mỗi lỗ (cụ thể số lượng tế bào được sử dụng cho mỗi lỗ, cần phải được quyết định theo kích thước của tế bào, tốc độ tăng sinh tế bào nhanh và chậm). Đặt 37 ℃ 5% CO2 tế bào nuôi cấy trong 24 giờ.
2、. Thêm nồng độ thích hợp của hợp chất thử nghiệm 0-10μL.
- Ủ tấm 96 lỗ ở 37 độ C, chứa 5% không khí CO2 và 100% độ ẩm trong môi trường nuôi cấy tế bào.
4, 5 × MTT pha loãng với dung dịch pha loãng thành dung dịch 1 × MTT.
Thêm dung dịch 50 μL 1 × MTT cho mỗi lỗ, ủ ở 37 ℃ trong 4 giờ, để MTT giảm xuống methylene.
6, Hấp thụ chất lỏng thượng lưu, cộng với 150μL DMSO mỗi lỗ để làm cho methylene hòa tan, lắc đều bằng máy lắc phẳng.
7, Enzyme phát hiện mật độ ánh sáng của mỗi lỗ ở bước sóng 570nm (chẳng hạn như không có bộ lọc 570nm, có thể sử dụng bộ lọc 560-600nm).
8, Phân tích kết quả
a、 Tỷ lệ sống sót của tế bào: Giá trị ODD của mỗi lỗ thử nghiệm được trừ đi giá trị ODD cơ bản (* môi trường cộng với MTT, không có tế bào) hoặc giá trị ODD của lỗ thuốc trống (* môi trường cộng với độ pha loãng khác nhau của thuốc thử cộng với MTT, không có tế bào), giá trị ODD của mỗi lỗ lặp lại được tính trung bình ± SD. Tỷ lệ sống sót của tế bào được thể hiện bằng T/C%, T là giá trị ODD của tế bào định lượng và C là giá trị ODD của tế bào đối chứng. Tỷ lệ sống của tế bào%=(OD tế bào định lượng/OD tế bào kiểm soát) × 100
b、 Tìm nồng độ thuốc khi T/C=50% (IC50) và T/C=10% (IC90)