Danh mục sản phẩm

C?ng ty TNHH C?ng nghi?p Bang Jing Th??ng H?i

Thông tin E-mail
3004965510@qq.com
Điện thoại
15000017673
Địa chỉ
Qu?n Songjiang, Th??ng H?i

Liên hệ bây giờ

Bộ xét nghiệm MTT

Có thể đàm phánCập nhật vào02/17

Mô hình

Thiên nhiên của nhà sản xuất: Nhà sản xuất

Danh mục sản phẩm

Nơi xuất xứ

Tư vấn trực tuyến

Tổng quan

Sản phẩm mà MTT Test Kit đang bán: PC-3M (Tế bào ung thư tuyến tiền liệt của con người) 5 #215; 106cells/chai #215; 2-295 (người XG ác tính glioma tế bào) 5 #215; 106cells/chai #215; 2SMC-1 (tế bào u màng phổi người) 5 #215; 106cells/chai #215; 2SW1116 (tế bào ung thư tuyến đại tràng của con người) 5 #215; 106cells/chai #215; 2-13 (tế bào ung thư thực quản ở người) 5 #215; 106cells/chai #215; 2

Chi tiết sản phẩm

Thông số sản phẩm:

Trung QuốcName	Tên tiếng Anh	Thông số kỹ thuật sản phẩm	Số sản phẩm
Bộ xét nghiệm MTT	Bộ thử nghiệm MTT	500 lần	BJ-01X6322

MTT được sử dụng rộng rãi để phát hiện sự phát triển của tế bào, dựa trên nguyên tắc MTT có thể được khử bởi enzyme dehydrogenase trong ty thể của tế bào sống để tạo ra kết tinh formazan màu tím đậm, trong khi các tế bào chết không có hoạt động này. Tinh thể formazan màu tím đậm sau khi hòa tan có thể được xác định nồng độ của nó bằng cách xác định sự hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 490nm, và từ đó suy đoán sức sống của tế bào, sự nhân lên của tế bào càng mạnh, độ hấp thụ ánh sáng càng cao; Độc tính tế bào càng lớn, độ hấp thụ ánh sáng càng thấp.

Giới thiệu chi tiết hàng hóa:

Tính năng sản phẩm:
1. Dung dịch hòa tan Formazan * được sử dụng, có thể hòa tan Formazan đầy đủ, giảm lỗi.
2. Nền thấp, độ nhạy cao, phạm vi tuyến tính rộng và khả năng lặp lại tốt.
3. Sản phẩm này là đủ 500 lần (5 tấm nuôi cấy tế bào 96 lỗ) để kiểm tra tấm micropore.
4. Nó có thể được sử dụng để phát hiện hoạt động của các yếu tố hoạt tính sinh học, sàng lọc thuốc chống ung thư, xét nghiệm độc tế bào, xác định độ nhạy bức xạ khối u, v.v.
Điều kiện bảo quản: vận chuyển ở nhiệt độ thấp, -20 ℃ bảo quản (nhưng dung dịch B cũng có thể được vận chuyển và bảo quản ở nhiệt độ bình thường), có hiệu lực trong một năm.
Phương pháp sử dụng:
Các thao tác sau đây là các thử nghiệm để phát hiện độc tính tế bào, các ứng dụng khác tương tự hoặc đơn giản hơn (ví dụ: thử nghiệm đường cong tăng trưởng), các bước thao tác có thể được thực hiện trên cơ sở này với những thay đổi nhỏ, vì vậy không cần phải nói thêm.
I. Tiêm tế bào
1. Tiêu hóa một lớp tế bào hội tụ theo phương pháp tiêu hóa thông thường, thu thập vào môi trường có chứa huyết thanh.
2. 200g ly tâm 5 phút để thu thập lượng mưa tế bào.
3. Kết tủa với các tế bào treo lại môi trường, chuẩn bị đình chỉ đơn bào và đếm.
Pha loãng tế bào trong khoảng 2,5 × 103/mL~5 × 10/mL (cần xác định theo tốc độ tăng trưởng của tế bào), nếu không biết mức độ tăng trưởng, thường có thể pha loãng đến 1 × 10/mL.
5. Chuyển đủ lượng đình chỉ tế bào vào đĩa petri (dễ lấy mẫu bằng súng trung đội). Xét nghiệm MTT cho một tấm 96 lỗ đòi hỏi khoảng 20mL đình chỉ tế bào.
6. Dùng súng trung đội thêm vào chính giữa các lỗ trong cột 2 - 11 của tấm 96 lỗ (đối với tế bào bình thường). Nếu đó là một tế bào khối u, đình chỉ tế bào khối u 100 μL và môi trường 100 μL (tổng thể tích 200 μL) được thêm vào. Chú ý: Nhất định phải thêm tế bào vào chính giữa lỗ, nếu không tế bào sẽ tụ tập ở góc lỗ, ảnh hưởng đến thử nghiệm.
7. Dùng súng trung đội thêm vào các lỗ thứ nhất và thứ 12 của bảng 96 lỗ để nuôi cấy các thể tích như huyền dịch tế bào. Các lỗ trong cột 1 sẽ hoạt động như+môi trường - tế bào+MTT kiểm soát (để đo thời gian OD bằng 0) và vai trò của môi trường cộng với cột 12 là giảm tác động của hiệu ứng limbic đối với phản ứng cột 11.
8. Ủ ở 37 ℃ và 5% CO2 trong 1-3 ngày theo phương pháp nuôi cấy tế bào thông thường, đưa tế bào vào giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân.
II. Xử lý thuốc
9. Dùng môi trường để pha loãng thuốc đến 8 nồng độ cần kiểm tra (nếu không biết nồng độ cần kiểm tra, cần xác định trước khi kiểm tra), nói chung một loại thuốc cần làm 3 tấm song song.
10. Loại bỏ môi trường (không chạm vào tế bào) trong các lỗ từ cột 2 đến 11 (trong tổng số 10), giữ lại môi trường trong các lỗ từ cột 1 và 12.
11. Thêm 200μL môi trường tươi vào các lỗ khác nhau của cột 2 và 11 (trong 2 cột) sẽ hoạt động như một đối chứng+môi trường+tế bào-thuốc.
12. Thêm 8 độ dốc nồng độ của thuốc đang được thử nghiệm vào các lỗ từ cột 3 đến 10 (trong tổng số 8 cột), mỗi cột thêm một nồng độ thuốc.
Theo phương pháp thông thường, tấm 96 lỗ tiếp tục được ủ ở 37 ℃ và 5% CO2 trong một khoảng thời gian nhất định, thời gian này là thời gian xử lý tế bào thuốc, do người dùng tự quyết định.
14. Loại bỏ môi trường trong tất cả các lỗ từ cột 2 đến 11 (trong tổng số 10 cột, tất cả đều chứa tế bào) sau khi xử lý và thêm môi trường tươi 100 μL.
Thay đổi nuôi cấy hàng ngày làm tăng số lượng tế bào lên 2-3 lần (thời gian cần thiết thay đổi tùy theo tế bào).
III. Số lượng tế bào sống
16. Vào cuối sự phát triển, sau khi loại bỏ môi trường trong các lỗ từ cột 1 đến 11, thêm môi trường tươi 100 μL và dung dịch A 10 μL (với thành phần MTT), bọc tấm 96 lỗ bằng lá thiếc và đặt ở 37 ℃ và 5% CO2 tiếp tục nuôi trong 4-8 giờ. Lưu ý: Dung dịch A sẽ đông cứng ở nhiệt độ thấp, trước khi sử dụng xin vui lòng đặt ở nhiệt độ phòng hoặc tắm nước 20-25 ℃ cho đến khi hòa tan hoàn toàn, lắc và sử dụng. MTT là chất gây ung thư và phải được vận hành bằng găng tay.
17. Cẩn thận với môi trường bên trong lỗ hút (với dung dịch A). Vì môi trường có thể ảnh hưởng đến sự hấp thụ ánh sáng, tốt nhất là loại bỏ nó càng nhiều càng tốt.
18. 100 μL dung dịch B được thêm vào mỗi lỗ, dao động tốc độ thấp trên máy lắc trong 10 phút để tinh thể formazan được hình thành bởi MTT hòa tan hoàn toàn.
19. Do sản phẩm không ổn định, cần phải ngay lập tức chọn 490nm trên máy kiểm tra miễn dịch liên kết enzyme để xác định độ hấp thụ.
Lưu ý: Zero với các lỗ khác nhau trong cột 1 (+môi trường - tế bào+MTT kiểm soát).
20. Đếm trung bình của mỗi lần lặp lại được xử lý giống nhau.
21. Lấy nồng độ thuốc làm trục ngang và độ hấp thụ làm trục dọc để vẽ đường cong. Vì giá trị tuyệt đối của độ hấp thụ khác nhau đáng kể giữa các phương pháp điều trị, nó thường cần được chuyển đổi thành tỷ lệ ức chế tăng trưởng (trung bình 100% dữ liệu lỗ ở cột 2 và 11 mà không cần thuốc), để dễ dàng tính toán IC50 để so sánh hiệu quả của các phương pháp điều trị thuốc khác nhau. Lưu ý: Nếu đo đường cong tăng trưởng, thời gian sẽ là trục ngang. Đường cong sinh trưởng bình thường thường hiện ra hình chữ S, có tác dụng xúc tiến thì độ nghiêng tăng lên.

Báo cáo thí nghiệm:

Một, tách ra và bồi dưỡng:

Trong điều kiện vô trùng, mô tâm nhĩ chuột SD 1-3d tuổi được lấy ra, sau đó khối mô này được làm sạch 2 lần bằng PBS, và cuối cùng mô được cắt thành kích thước khoảng 1 mm 3;

2, thêm 4 mL chất lỏng tiêu hóa enzyme (0,1% và 0,1% collagen loại I) vào khối mô, treo 10 giây, tiêu hóa 10 phút trong điều kiện 37 ℃, sau đó thổi bằng ống nhỏ giọt để làm đình chỉ tế bào đơn, kết tủa tự nhiên và thu thập thanh lọc, với môi trường FBS 10% để chấm dứt tiêu hóa sau khi đặt 4 ℃;

3, các mô còn lại thêm 3~4mL enzyme tiêu hóa dịch, treo trong 10 giây, sau khi đặt 37 ℃ tiêu hóa trong 10 phút, theo các phương pháp trên thu thập thanh lọc và chấm dứt tiêu hóa sau khi đặt 4 ℃, lặp lại bước này 2-3 lần, cho đến khi mô * được tiêu hóa;

4, lọc chất lỏng tiêu hóa tế bào bằng lưới thép không gỉ 200 lưới, ly tâm 1200r/phút 10 phút, loại bỏ và làm sạch, các tế bào kết tủa được sử dụng với 10% FBS DMEM/F12 phương tiện truyền thông đình chỉ, tiêm trong 25cm2 chai, đặt ở 37 ℃, 5% CO2 nuôi cấy;

5. Sau khi dán tường vi sai 1h, hút môi trường nuôi cấy, theo yêu cầu thí nghiệm để tiêm vào tấm 6 lỗ để tiếp tục nuôi cấy;

Giám định huỳnh quang miễn dịch:

Khi tế bào cơ nhĩ phát triển đến 80% dung hợp, loại bỏ môi trường, rửa sạch tế bào bằng PBS ấm 2 lần, mỗi lần 10 phút, sau đó cố định tế bào bằng 4% paraformaldehyde ở nhiệt độ phòng trong 15 phút;

2, PBS rửa tế bào 2 lần, mỗi lần 10 phút, sau đó ở 4 ℃, với 0,1% Triton X-100 xuyên qua màng 15 phút;

PBS xả tế bào 2 lần, mỗi lần 10 phút, sau đó ở nhiệt độ phòng, đóng tế bào với 4% BSA trong 30 phút;

Pha loãng alpha-actin theo tỷ lệ 1: 100, sau đó đặt nó trong tủ lạnh 4 ° C để ủ tế bào qua đêm;

5, PBS tuôn ra các tế bào 3 lần, mỗi lần 10 phút, pha loãng kháng thuốc kháng alpha-actin theo tỷ lệ 1: 150, đặt ở 37 ℃ trong 1 giờ;

Rửa bằng PBS 3 lần, mỗi lần 10 phút, cuối cùng xem hình ảnh dưới kính hiển vi huỳnh quang đảo ngược và chụp ảnh.

Các bước hoạt động vun đắp:

1. Loại bỏ nắp trượt từ 75% ethanol bằng nhíp nắp, lau sạch bằng vải lụa vô trùng, không sử dụng gạc;

2. Nhẹ nhàng đặt nắp vào đĩa nuôi cấy 6 lỗ (một miếng mỗi lỗ) hoặc đĩa petri (có thể đặt 2-3 miếng mỗi đĩa phẳng);

3. Chiếu xạ 2-3 giờ ở khoảng cách 20-30 cm từ đèn UV trực tiếp;

4. Di chuyển hệ thống treo tế bào đếm vào bảng nuôi cấy, cho phép nắp * ngâm trong dung dịch nuôi cấy;

5. ủ tấm nuôi cấy ở 37 ℃ trong 5% CO2 bồn tắm ủ 2-3 ngày, khi các tế bào dán tường phát triển đến 2/3 diện tích dưới cùng của tấm nuôi cấy, loại bỏ tấm nuôi cấy, nhẹ nhàng loại bỏ tấm che bằng nhíp nắp, sau khi rửa bằng nước cất có thể thực hiện sửa chữa nhanh chóng cũng như phát hiện hóa học tế bào miễn dịch.

Điểm thí nghiệm và mô tả:

1. Phương pháp này phù hợp với nuôi cấy tế bào dán tường, không phải nuôi cấy tế bào treo, có thể sử dụng phương pháp nhỏ giọt cho các tế bào treo;

2. Miếng che được sử dụng phải là kính chất lượng cao và được xử lý bằng kem dưỡng da axit cromic;

3. Tấm che rất mỏng, dễ vỡ, khi lấy và đặt tấm che thì hành động phải nhẹ;

4. Nếu cần nhiều tế bào với trạng thái tăng trưởng phù hợp, bạn có thể sử dụng đĩa petri lớn hơn, nhưng không nên quá lớn, để tránh lãng phí chất lỏng nuôi cấy và tăng khả năng ô nhiễm;

5. Nếu khả năng phát triển thành tế bào kém, nắp có thể được ngâm trong dung dịch polylysine 0,5% trong 5-10 phút và để khô tự nhiên.

Điểm hoạt động:

1) Làm nóng nền văn hóa trong nồi tắm nước 37 ℃; Chuẩn bị một ống ly tâm vô trùng 15mL và thêm môi trường làm nóng sơ bộ 8mL.

2) Lấy tế bào đông lạnh ra khỏi bể nitơ lỏng, nhanh chóng đặt vào nồi nước 37 ℃ để làm ấm lại (có thể chuẩn bị một cốc sạch, chứa đầy nước 37 ℃, sau khi lấy ống đông lạnh tế bào, nhanh chóng đưa vào cốc, sau đó chuyển dần vào nồi nước). Nhẹ nhàng lắc ống đông để các tế bào có thể tan băng trong vòng 1-2 phút, cho phép các tế bào đi qua phần nhiệt độ dễ bị tổn thương nhất (-5-0 ° C) càng sớm càng tốt. Lưu ý rằng miệng ống lưu trữ đông lạnh không thể chìm vào nước, BRL (tế bào gan chuột) tránh gây ô nhiễm.

3) Lau ống lưu trữ đông lạnh bằng cồn 75% trước khi đặt trong bàn siêu sạch, chuyển các tế bào trong ống vào ống ly tâm đã chuẩn bị, nhẹ nhàng thổi chất lỏng để các tế bào phân tán đều, giảm nồng độ DMSO và tránh tạo bọt khí khi thổi. Rửa tường ống 2 lần với môi trường tươi, tất cả đều được chuyển vào ống ly tâm.

4) 800rpm ly tâm 5 phút, bỏ sạch, thêm môi trường tươi, thổi vào đình chỉ tế bào.

5) Chuyển đình chỉ tế bào vào chai tế bào T25, bổ sung một lượng vừa phải của môi trường, nhẹ nhàng lắc chai tế bào để phân phối tế bào đồng đều, đặt trong hộp ấm để nuôi cấy.

6) Quan sát sự phát triển của các tế bào dán tường vào ngày hôm sau và thay đổi môi trường tươi để loại bỏ các tế bào chết. Tiếp tục nuôi cấy, đợi tế bào dài đến 80 - 90% hội tụ thì truyền lại bình thường. Thông thường, các tế bào vừa hồi phục phải trải qua 2-3 lần truyền, sau khi khôi phục sức sống tế bào mới có thể tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.

Kháng thể ức chế enzyme chuyển đổi angiotensin 1

Kháng thể đối kháng với yếu tố phiên mã apoptosis

Alpha-1 chống tụy

Họ protein liên kết ATP 6 kháng thể

Adenosine triphosphate binding box subfamily G1 kháng thể

Kháng thể thụ thể lipoprotein 2

Kháng thể protein ANGEL1

Kháng thể protein ANGEL2

Kháng thể protein ANKLE2

Tinh hoàn đặc hiệu Anchor Protein 1 Kháng thể

Kháng thể vùng lặp lại protein neo 13B

Kháng thể vùng lặp lại protein neo 20A1

Kháng thể vùng lặp lại protein neo 20A3

Kháng thể vùng lặp lại Anchor Protein 22

Kháng thể vùng lặp lại Anchor Protein 50

BC-020 (tế bào ung thư vú người) 5 × 106cells/lọ × 2

BC-021 (tế bào ung thư vú người) 5 × 106cells/lọ × 2

BC-022 (tế bào ung thư vú người) 5 × 106cells/lọ × 2

BE (2) -M17 (tế bào nguyên bào thần kinh người) 5 × 106cells/lọ × 2

BGC-803 (tế bào ung thư dạ dày ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

C918 (tế bào khối u ác tính mạch mắt người) 5 × 106cells/lọ × 2

CAL-27 (tế bào ung thư vảy lưỡi người) 5 × 106cells/lọ × 2

LS 180 (tế bào ung thư tuyến đại tràng của con người) 5 × 106cells/lọ × 2

CNE-2Z (tế bào ung thư vòm họng ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

Bộ xét nghiệm MTTCOLO 201 (tế bào ung thư tuyến đại trực tràng của con người) 5 × 106cells/lọ × 2

CW-2 (tế bào ung thư ruột kết ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

CRT (tế bào thần kinh đệm ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

D283 Med (tế bào nguyên bào tủy não người) 5 × 106cells/lọ × 2

EA.hy926 (tế bào dung hợp tế bào tĩnh mạch rốn người) 5 × 106cells/lọ × 2

ECV-304 (tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người) 5 × 106cells/lọ × 2

EJ (tế bào ung thư bàng quang người) 5 × 106cells/lọ × 2

H-97 (tế bào ung thư gan di căn cao ở người) 5 × 106cells/lọ × 2

Sản phẩm tương tự Khuyến nghị