Tế bào ung thư gan ở chuột HEP-53.4

thông tin cơ bản

Tên tế bào：Tế bào ung thư gan ở chuột HEP-53.4

Biệt danh tế bào：HEP-53.4 ; 53.4 ; Tế bào ung thư gan chuột

Nguồn Cell：Đức

Xác định tế bào：Chứng nhận STR đã được thông qua

Hình thái tế bào：Tế bào biểu mô, phát triển trên tường

Cơ sở nuôi trồng：DMEM (với NaHCO3 1.5g/L) (BasMed-AW-013)+FBS 10%+P/S1%

Điều kiện nuôi dưỡng：Giai đoạn khí: Không khí, 95%; CO2, 5%. Nhiệt độ: 37 độ C, 70% -80% độ ẩm trong buồng nuôi cấy

Điều kiện lưu trữ đông lạnh：Không lưu trữ huyết thanh, lưu trữ nitơ lỏng

Nền tế bào：Bắt nguồn từ ung thư biểu mô tế bào gan nguyên phát ở chuột C57BL/6J, những tế bào gan này đại diện trung thành cho ung thư biểu mô tế bào gan và cung cấp các mô hình có giá trị để nghiên cứu loại ung thư gan này, các từ đồng nghĩa HEP-53.4 và 53.4, giúp dễ dàng xác định và tham chiếu chéo, một vấn đề sức khỏe nghiêm trọng mà các tế bào này có thể thực hiện các nghiên cứu chính xác về các con đường phân tử, tương tác tế bào và chiến lược điều trị của chúng, có nguồn gốc từ Musculus (chuột), cung cấp một hệ thống mô hình liên quan để hiểu và phát triển các phương pháp điều trị cho bệnh ung thư biểu mô tế bào gan.

Sử dụng tế bào：Chỉ dùng cho nghiên cứu khoa học

Thời hạn sử dụng tế bào: trong kho, khoảng 1 tuần

Lưu ý

1. Tiêu hóa thường xuyên thu thập ly tâm tế bào.

2. Sau khi ly tâm bỏ đi thanh lọc bên trong ống ly tâm, thêm vào khoảng 1 ml tế bào treo nặng trộn đều, đề nghị nhẹ nhàng lắc lư hoặc nhẹ nhàng thổi tế bào, đưa vào hộp nuôi cấy tiêu hóa tế bào, lại tiêu hóa khoảng 1 phút.

3. Sau khi tiêu hóa tốt, nhẹ nhàng thổi đình chỉ tế bào bằng pipet gun để phân tán các khối tế bào, nhanh chóng thêm 3-5ml môi trường chứa huyết thanh trộn đều để chấm dứt tiêu hóa, loại bỏ ly tâm.

4. Thêm vào khoảng 5 ml tế bào tương ứng với môi trường nuôi cấy trộn đều, kết nối với bình nuôi cấy theo tỷ lệ.

Dưới kính hiển vi quan sát xem tế bào có phân tán đồng đều hay không, nếu có một lượng nhỏ tế bào nhỏ thành cụm có thể không cần tiêu hóa lại, để sau khi dán tường tế bào ổn định rồi mới tiêu tán tế bào.

Vận chuyển ở nhiệt độ bình thường

Sau khi nhận được, bình T2 khử trùng và đặt trong hộp nuôi cấy 2 - 3 giờ, sau khi quan sát mật độ và trạng thái chụp ảnh 2 - 3 tấm phản hồi cho tiêu thụ, mật độ đạt tiêu chuẩn là có thể truyền lại. Tỷ lệ truyền đời giai đoạn đầu là 1,2, đợi đến khi truyền đời sau thì đề nghị đông lạnh một bình thành 1 ống lưu trữ đông lạnh 1 ml, một bình khác tiếp tục truyền đời, sau khi đông lạnh nhiều lần 2 - 3 con mới mở rộng làm thí nghiệm, phòng ngừa tình huống đột phát gây ra đứt đoạn.

Vận chuyển đá khôThông thường tế bào vận chuyển đông lưu trữ ống 2, phục hồi 1, một dự phòng khác, phục hồi đầu tiên không thành công khi phục hồi nghiêm ngặt theo yêu cầu của nhà sản xuất phục hồi ống thứ hai, không có phục hồi thành công tình huống ngay lập tức lưu trữ phục hồi hình ảnh thông báo cho chúng tôi.

Tế bào ung thư gan ở chuột HEP-53.4

tế bào dán tường

1. Bỏ đi nuôi cấy, rửa sạch tế bào bằng PBS không chứa canxi, ion magiê 1 - 2 lần.

2. Thêm 0,25% (w/v) 0,53 mM EDTA vào chai nuôi cấy (T25 chai 1-2mL, T75 chai 2-3mL), đặt trong một hộp nuôi cấy 37 ℃ tiêu hóa trong 1-2 phút (các tế bào khó tiêu hóa có thể kéo dài thời gian tiêu hóa thích hợp), sau đó quan sát sự tiêu hóa của tế bào dưới kính hiển vi, nếu hầu hết các tế bào tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều khiển, sau khi gõ vài cái vào chai nuôi cấy thêm 3-4ml môi trường chứa 10% FBS để chấm dứt tiêu hóa.

3. Nhẹ nhàng đánh đều rồi hút ra, ly tâm 3 - 5 phút trong điều kiện 1000 vòng M, bỏ đi chất lỏng, bổ sung 1 - 2 ml chất lỏng nuôi cấy rồi thổi đều. Đình chỉ tế bào được chia thành chai T25 mới/đĩa petri 6cm theo tỷ lệ 1: 2, thêm 6-8ml môi trường mới được cấu hình theo yêu cầu của hướng dẫn để duy trì sự tăng trưởng của tế bào, truyền thừa tiếp theo được thực hiện theo tỷ lệ 1: 2~1: 5 theo tình hình thực tế.

4. Đóng băng tế bào: Sau khi nhận được tế bào, nên đóng băng một số hạt giống tế bào trong quá trình nuôi cấy 3 thế hệ đầu tiên để sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo.

Môi trường vận chuyển (môi trường truyền dịch) không còn có thể được sử dụng để nuôi cấy tế bào, hãy thay thế bằng môi trường mới được điều chế theo các điều kiện nuôi cấy tế bào hướng dẫn.

Tế bào lơ lửng

Các tế bào phát triển trong trạng thái lơ lửng, có thể duy trì trạng thái tăng trưởng của tế bào bằng cách thêm môi trường nuôi cấy vào chai, nói chung, duy trì mật độ tế bào ở mức 1 × 10 ⁵~1 × 10 ⁶/mL (các tế bào khác nhau yêu cầu mật độ khác nhau) có thể duy trì sự phát triển bình thường của tế bào. Nếu cần chia chai có thể thu thập huyền phù tế bào vào ống ly tâm 1000rpm, ly tâm 5 phút, bỏ đi làm sạch, bổ sung 1-2mL nuôi cấy sau khi treo lại hỗn hợp, huyền phù tế bào được chia theo tỷ lệ 1: 2 vào chai T25 mới, thêm 6-8ml theo yêu cầu của hướng dẫn cấu hình môi trường mới để duy trì sức sống tăng trưởng của tế bào, tiếp theo truyền theo theo tình hình thực tế theo tỷ lệ 1: 2~1: 4.

Hình thức vận chuyển

Nhiệt độ thấp: 1mL đông lưu trữ đóng gói băng khô vận chuyển, sau khi nhận được -80 độ tủ lạnh lưu trữ qua đêm sau khi chuyển sang nitơ lỏng hoặc hồi sức trực tiếp, nếu bạn thấy rằng đá khô đã bay hơi sạch sẽ, nắp chai đông lưu trữ rơi ra, bị hỏng và ô nhiễm tế bào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi ngay lập tức.

Nhiệt độ bình thường: T25 chai hồi sức tế bào sống sót được vận chuyển ở nhiệt độ bình thường, sau khi nhận được hoạt động theo phương pháp xử lý sau khi tế bào nhận được.

An toàn sinh học

Tất cả các tế bào động vật được coi là có khả năng gây nguy hiểm sinh học, phải được vận hành trong bảng an toàn sinh học thứ cấp và chú ý bảo vệ, tất cả các chất thải và dụng cụ đã tiếp xúc với tế bào này cần được khử trùng để loại bỏ.

2. Nên luôn sử dụng găng tay bảo hộ, quần áo và đeo mặt nạ bảo hộ khi hồi sức các tế bào đông lạnh. LƯU Ý: Các ống lưu trữ đông lạnh bị rò rỉ khi ngâm trong nitơ lỏng và sẽ từ từ được lấp đầy bằng nitơ lỏng. Khi tan băng, việc chuyển đổi nitơ lỏng thành pha khí có thể khiến thùng chứa phát nổ hoặc thổi bay nắp của nó bằng lực nguy hiểm, tạo ra các mảnh vụn bay để gây thương tích cho người.

Đặc biệt chú ý

Tế bào này phát triển tốt trong môi trường DMEM (chứa 1,5g/LNaHCO3), hầu hết trong số đó chứa nồng độ NaHCO3 cao hơn (3,7g/L) và cần tăng nồng độ CO2 (7% -10%) khi nuôi cấy tế bào với môi trường DMEM (3,7g/L NaHCO3).